SNAP 23 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-417781-ACT

SNAP23 codifica a proteína associada a sinaptossomos 23, uma Qbc-SNARE que se associa a sintaxinas e a membros da família VAMP para catalisar eventos de fusão de membranas necessários para a exocitose regulada e constitutiva. A SNAP23 dá suporte ao ancoramento e ao tráfego de vesículas na membrana plasmática, influenciando a secreção, a reciclagem endocítica e a translocação do GLUT4 em células responsivas à insulina. Por meio do controle da fusão de grânulos e vesículas, contribui para a degranulação de células imunes e a liberação de citocinas, e sua desregulação tem sido associada a alterações na sinalização inflamatória e a fenótipos metabólicos relevantes para pesquisas em diabetes e obesidade. A SNAP23 também interage com vias que governam a dinâmica de membranas e a disponibilidade de receptores na superfície celular, conectando o tráfego vesicular ao output de sinalização em diversos tipos de células humanas.

SNAP 23 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SNAP23 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

SNAP 23 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SNAP23 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SNAP23, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de SNAP 23. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SNAP23 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de SNAP 23 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via SNAP 23 em células tumorais com expressão de SNAP23 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.