SMG8 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-408902-ACT

SMG8は、ナンセンス変異依存mRNA分解（NMD）を制御するSMG1C複合体の中核構成因子をコードしています。NMDは、早期終止コドンを含む転写産物を検出して分解する、保存されたRNA監視経路です。SMG8はSMG1キナーゼ活性を調節し、UPF1のリン酸化動態を協調させることで、翻訳終結をmRNPの再構成および標的mRNAの分解へと結び付けるのに寄与します。これらの機構を通じて、SMG8はトランスクリプトームの品質管理、プロテオスタシス、ならびにストレス応答性の遺伝子発現プログラムに関与します。NMDの異常やSMG8に関連するRNA代謝の撹乱は、細胞恒常性の変化と関連していることが示されており、神経発生に関わる表現型や、がんに関連する遺伝子発現変動などの文脈で研究されています。

SMG8 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SMG8の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

SMG8 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SMG8 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSMG8転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性SMG8の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSMG8遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSMG8依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSMG8発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSMG8経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。