SLX4IP CRISPR Activationプラスミド (h): sc-407109-ACT

ヒトSLX4IP（SLX4 interacting protein）は核内因子であり、構造特異的エンドヌクレアーゼのネットワークやDNA修復スキャフォールドとの相互作用を通じて、ゲノム完全性の維持に関与すると考えられています。複製に関連したDNA損傷応答、テロメア恒常性、ならびに複製ストレス下で生じ得る複雑なDNA構造の解消を制御する経路との関連が報告されています。SLX4IPの発現変動は、細胞の増殖能やゲノム安定性の表現型に影響するテロメア長調節機構と関連づけられています。これらの機能により、SLX4IPは、DNA修復経路の配線、染色体安定性、ならびにがんやその他のゲノム不安定性関連疾患に関係するストレス適応プログラムを研究するための有用な標的となります。

SLX4IP CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SLX4IPの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

SLX4IP CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SLX4IP 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSLX4IP転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性SLX4IPの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSLX4IP遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSLX4IP依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSLX4IP発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSLX4IP経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。