SLUG CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400389-ACT
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- SLUG CRISPR Activationプラスミド (h)は、特異的に遺伝子の発現量を増加させるため、相乗的活性化メディエーター(SAM)転写活性化システムです。
- SLUG CRISPR Activationプラスミド (h)は、1:1:1の質量比で以下の3つのプラスミドがら成る：トランス活性化ドメインVP64に溶解する非活性化されたCas9 (dCas9)ヌクレアーゼ(D10A と H840A)をコード化したのプラスミド（ブラストサイジン耐性遺伝子を含めて）、MS2-p65-HSF1融合蛋白質をコード化したのプラスミド（ハイグロマイシン耐性遺伝子を含めて）、2つのMS2 RNAアプタマーに溶解する目標特異的な20ntガイドRNAをコード化したのプラスミド（ピューロマイシン耐性遺伝子を含めて）。
- 得られたSAM複合体は、部位特異的な約200-250nt転写開始点の上流の領域に結合し、転写因子の強いリクルートメントを提供し、遺伝子の高い活性化効果が得られます。
- SLUG CRISPR活性化プラスミド（h）およびSLUG CRISPR活性化プラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、SNAI2転写開始点の上流にある異なる調節領域を標的としています。いずれか一方、または両方のデザインが利用可能である可能性があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: SLUG 抗体 (A-7): sc-166476
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
SLUG CRISPR Activationプラスミド (h) | sc-400389-ACT | 20 µg | $397.00 |
ヒトSNAI2は、亜鉛フィンガー型転写因子SLUGをコードしている。SLUGは上皮―間葉転換（EMT）の中核的制御因子であり、上皮性の接着プログラムを抑制する一方で、間葉系形質、運動能、細胞状態の可塑性を促進する。SLUGはTGF-β、WNT/β-カテニン、NOTCH、受容体型チロシンキナーゼなどの経路からのシグナル入力を統合し、分化、遊走、ストレス下での生存を制御する転写ネットワークを協調的に調節する。SNAI2活性の異常は、浸潤や転移様挙動を含む腫瘍進行の表現型と関連し、また複数のがん種において治療抵抗性や幹細胞様サブポピュレーションの維持とも結び付けられている。腫瘍学領域にとどまらず、SLUGは発生過程や組織リモデリングにも寄与するため、系譜選択や細胞遷移の転写制御を研究するうえで有用な標的（ノード）となる。
SLUG CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SNAI2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。
SLUG CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SNAI2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。
標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSNAI2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性SLUGの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSNAI2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSLUG依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSNAI2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSLUG経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。