Slit1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404033-ACT

SLIT1 codifica a Slit1, um sinalizador secretado de orientação que atua principalmente por meio de receptores ROBO para regular o direcionamento de axônios, a migração neuronal e o ramificação de neuritos durante o desenvolvimento do sistema nervoso. A sinalização Slit1–ROBO interage com vias de remodelamento do citoesqueleto, incluindo a dinâmica de actina dirigida por GTPases da família Rho, para coordenar o movimento celular direcionado e o padrão de organização dos tecidos. Além de suas funções na formação de circuitos neurais, a expressão de SLIT1 e a atividade dessa via são estudadas em contextos de motilidade celular aberrante e sinalização do microambiente, incluindo fenótipos do neurodesenvolvimento e migração desregulada observada em modelos associados a doenças.

Slit1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SLIT1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Slit1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SLIT1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SLIT1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Slit1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SLIT1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Slit1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Slit1 em células tumorais com expressão de SLIT1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.