Slfn14 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-415573-ACT

O SLFN14 humano codifica o membro 14 da família Schlafen (Slfn14), uma proteína putativamente ligante de RNA implicada na regulação pós-transcricional e no controle da síntese proteica em linhagens hematopoéticas. As proteínas SLFN estão amplamente associadas à sinalização imune inata e às respostas ao estresse celular, com funções que podem influenciar o processamento de RNA associado aos ribossomos e o rendimento translacional. O SLFN14 é particularmente relevante para a biologia plaquetária, e alterações em sua função têm sido associadas à trombocitopenia hereditária e a fenótipos de disfunção plaquetária. Essas características tornam o SLFN14 um ponto útil para estudar o controle da expressão gênica na maturação de megacariócitos, na produção de plaquetas e em programas regulatórios adjacentes à imunidade.

Slfn14 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SLFN14 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Slfn14 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SLFN14 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SLFN14, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Slfn14. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SLFN14 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Slfn14 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Slfn14 em células tumorais com expressão de SLFN14 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.