SLC41A1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-406258-ACT

SLC41A1は、細胞膜に存在するマグネシウム輸送体をコードしており、細胞外へのMg2+排出と全体的なマグネシウム恒常性の維持に寄与します。マグネシウム恒常性は、酵素活性、ATP依存的な代謝、イオンチャネル調節を左右する重要な要因です。細胞内Mg2+の利用可能性を形作ることで、SLC41A1はヌクレオチド結合タンパク質やリン酸化ネットワークに結び付いたシグナル伝達過程に影響し、ミトコンドリア機能や細胞ストレス応答にも影響を及ぼし得ます。マグネシウム輸送の制御異常は、神経の興奮性の破綻や代謝表現型の異常と関連付けられており、SLC41A1は疾患関連の文脈でイオン恒常性を研究するうえで有用な結節点となります。そのため、神経生物学、バイオエナジェティクス、輸送生理学のモデルにおいて、その発現と活性がしばしば検討されています。

SLC41A1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SLC41A1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

SLC41A1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SLC41A1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSLC41A1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性SLC41A1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSLC41A1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSLC41A1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSLC41A1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSLC41A1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。