Plásmido CRISPR de Activación (h) SLC41A1: sc-406258-ACT

SLC41A1 codifica un transportador de magnesio de la membrana plasmática que contribuye al eflujo celular de Mg2+ y a la homeostasis general del magnesio, un determinante clave de la actividad enzimática, el metabolismo dependiente de ATP y la regulación de los canales iónicos. Al modular la disponibilidad intracelular de Mg2+, SLC41A1 influye en procesos de señalización acoplados a proteínas de unión a nucleótidos y redes de fosforilación, y puede afectar la función mitocondrial y las respuestas celulares al estrés. La regulación alterada del transporte de magnesio se ha asociado con una excitabilidad neuronal desregulada y fenotipos metabólicos, lo que convierte a SLC41A1 en un nodo útil para estudiar la homeostasis iónica en contextos relevantes para enfermedades. Por ello, su expresión y actividad se examinan con frecuencia en modelos de neurobiología, bioenergética y fisiología del transporte.

SLC41A1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SLC41A1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

SLC41A1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SLC41A1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SLC41A1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de SLC41A1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SLC41A1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de SLC41A1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía SLC41A1 en células tumorales con expresión de SLC41A1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.