SLC35G1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-405723-ACT

SLC35G1は、細胞内におけるヌクレオチド糖の輸送および分泌経路内の糖鎖付加関連プロセスに関与すると予測される、溶質キャリアファミリー35の膜タンパク質をコードします。糖鎖の組み立てに必要な活性化糖の利用可能性に影響を与えることで、SLC35G1はタンパク質および脂質の糖鎖修飾を調節し得る位置づけにあり、その結果としてタンパク質の折りたたみ、輸送、細胞間コミュニケーションに影響を及ぼす可能性があります。糖鎖修飾の異常やトランスポーター活性の変化は、シグナル伝達の破綻やストレス応答の異常としばしば関連するため、SLC35G1は分泌経路の代謝が細胞表現型をどのように形作るかを検討するうえで有用な標的となります。研究者は、疾患に関連する細胞状態において重要な、膜輸送、プロテオスタシス、ならびに受容体や接着分子機能の糖鎖依存的な制御という観点からSLC35G1を解析することがよくあります。

SLC35G1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SLC35G1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

SLC35G1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SLC35G1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSLC35G1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性SLC35G1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSLC35G1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSLC35G1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSLC35G1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSLC35G1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。