SLC35E3 Double Nickaseプラスミド (h): sc-412539-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- SLC35E3 Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- SLC35E3ダブルニカースプラスミド（h）およびSLC35E3ダブルニカースプラスミド（h2）は、SLC35E3を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
SLC35E3 Double Nickaseプラスミド (h) | sc-412539-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
SLC35E3 Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-412539-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SLC35E3は、溶質キャリアファミリー35に属するヌクレオチド糖トランスポーター様タンパク質と予測される因子をコードしており、分泌経路におけるヌクレオチド糖の取り扱いに関与し、小胞体およびゴルジ体ネットワークでの糖鎖付加関連プロセスを支えると考えられています。活性化糖ドナーの利用可能性に影響することで、SLC35E3はタンパク質および脂質の糖鎖生合成に寄与し得て、その結果、膜輸送、細胞間相互作用、受容体成熟などに影響を及ぼす可能性があります。糖鎖付加の変化は、免疫制御、発生における表現型、腫瘍に関連した細胞シグナル伝達の変化と広く関連しているため、SLC35E3は糖鎖依存的な生物学を検討するうえで有用な標的となります。SLC35E3の機能解析は、ヌクレオチド糖輸送能がゴルジ体の恒常性や細胞ストレス応答とどのように関わるのかを明確にする助けになります。
SLC35E3 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における SLC35E3 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、SLC35E3内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、SLC35E3の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、SLC35E3が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。