SLC35A4 Double Nickaseプラスミド (h): sc-414030-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- SLC35A4 Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- SLC35A4ダブルニカースプラスミド（h）およびSLC35A4ダブルニカースプラスミド（h2）は、SLC35A4を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
SLC35A4 Double Nickaseプラスミド (h) | sc-414030-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
SLC35A4 Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-414030-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SLC35A4は、ヌクレオチド糖トランスポーターからなる溶質キャリア（solute carrier）ファミリー35（SLC35）の一員をコードしており、糖鎖付加反応（グリコシル化）に必要な活性化糖をERおよびゴルジ体の内腔へ供給する役割を担うグループに属します。SLC35A4は他のSLC35パラログと比べて機能解析が十分に進んでいないものの、糖タンパク質や糖脂質の生合成、タンパク質のフォールディング、細胞内輸送に影響するヌクレオチド糖の恒常性制御に関与すると示唆されています。ヌクレオチド糖輸送および下流のグリコシル化ネットワークが乱れると、細胞表面の組成やシグナル伝達が再編され、接着、受容体の成熟、免疫認識といった過程に影響を及ぼし得ます。このためSLC35A4は、グライコミクスや分泌経路生物学における機構研究、ならびにグリコシル化異常が細胞ストレス応答や疾患関連表現型にどのように寄与するかを検討する上で注目されています。
SLC35A4 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における SLC35A4 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、SLC35A4内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、SLC35A4の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、SLC35A4が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。