SLC26A3 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403891-ACT

SLC26A3 は、主に腸管上皮細胞に発現する塩化物／重炭酸交換輸送体（DRA）をコードしており、電気的中性な NaCl 吸収を支えるとともに、協調的な陰イオン輸送を介して管腔内 pH を調節します。Cl⁻ の取り込みと HCO₃⁻ の分泌を共役させることで、SLC26A3 は上皮のイオン恒常性と体液バランスに寄与し、CFTR や他の SLC26 ファミリーメンバーを含む輸送ネットワークと機能的に相互作用します。SLC26A3 の機能障害または発現低下は先天性塩化物下痢症や、より広範な消化管における電解質処理の異常と関連しており、上皮輸送生理の研究における重要な標的となります。さらに、SLC26A3 活性の変化は、イオン性微小環境の変動を介して、粘膜バリア機能や炎症応答を制御する経路とも交差します。

SLC26A3 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SLC26A3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

SLC26A3 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SLC26A3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSLC26A3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性SLC26A3の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSLC26A3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSLC26A3依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSLC26A3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSLC26A3経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。