SLC25A11 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404380-ACT

SLC25A11（ミトコンドリア 2-オキソグルタル酸／リンゴ酸キャリア、OGC）は、ミトコンドリア内膜に局在する溶質キャリアであり、リンゴ酸と2-オキソグルタル酸を交換することで、トリカルボン酸（TCA）回路と細胞質代謝を結び付けています。リンゴ酸‐アスパラギン酸シャトルおよびミトコンドリアのレドックスバランスを支えることで、SLC25A11はNADH/NAD⁺恒常性、アナプレロ―シス、酸化的代謝の制御に寄与します。その活性は、グルタミンに駆動される炭素フラックス、活性酸素種（ROS）の処理、ならびに増殖状態やストレス適応状態の細胞で観察される代謝リプログラミングと交差します。SLC25A11の発現や機能の変化は、多様な実験系において、腫瘍生物学、ミトコンドリア機能不全、酸化ストレス感受性に関連する代謝異常と関連付けられています。

SLC25A11 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SLC25A11の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

SLC25A11 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SLC25A11 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSLC25A11転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性SLC25A11の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSLC25A11遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSLC25A11依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSLC25A11発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSLC25A11経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。