SLC12A9 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-408925-ACT

SLC12A9 は、陽イオン‐塩化物輸送に関連するタンパク質からなる溶質キャリアファミリー 12（SLC12）の一員をコードしており、細胞内膜を介したイオン恒常性の調節や、浸透圧バランス、pH、細胞容積応答の形成に関与すると考えられています。塩化物およびアルカリ金属陽イオンの取り扱いに影響することで、SLC12A9 は膜電位や、ストレス適応およびオルガネラ機能に結び付いたシグナル伝達経路にも影響を及ぼす可能性があります。発現変化やイオン輸送過程の破綻は、上皮および神経系の生理としばしば関連しており、電解質バランスや細胞容積制御が乱れる疾患に対しても幅広い関連性があります。そのため、SLC12A9 は、ヒトの系においてイオン輸送ネットワークと細胞状態制御を結び付ける機序研究の対象として注目されています。

SLC12A9 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SLC12A9の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

SLC12A9 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SLC12A9 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSLC12A9転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性SLC12A9の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSLC12A9遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSLC12A9依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSLC12A9発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSLC12A9経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。