SLAM Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-404289-LAC

SLAMF1 umano codifica SLAM (CD150), un recettore della superfamiglia delle immunoglobuline espresso principalmente sulle cellule ematopoietiche, incluse cellule T attivate, cellule B, cellule dendritiche e macrofagi. SLAM funziona come auto-ligando e trasduce segnali tramite motivi di commutazione basati su tirosina dei recettori immunitari, reclutando proteine adattatrici come SH2D1A/SAP ed EAT-2, modulando così vie a valle che regolano l’attivazione dei linfociti, la produzione di citochine, la citotossicità e le risposte dei centri germinativi. Attraverso la modulazione dell’organizzazione della sinapsi immunologica e di programmi di segnalazione collegati a NF-κB/MAPK, SLAM contribuisce al coordinamento della comunicazione tra immunità adattativa e innata. Alterazioni della segnalazione di SLAMF1 sono state associate a fenotipi di disregolazione immunitaria e sono spesso studiate nel contesto della biologia delle infezioni, delle risposte infiammatorie e dei meccanismi delle neoplasie ematologiche.

Le particelle di attivazione lentivirale SLAM (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di SLAMF1 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale SLAM (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione SLAMF1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di SLAM. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo SLAMF1 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.