Six2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-402975

Panoramica

SIX2 codifica Six2, un fattore di trascrizione homeobox che regola l’identità delle cellule progenitrici e l’organogenesi controllando l’impegno di linea e i programmi di segnalazione epitelio–mesenchimale. Nello sviluppo umano, Six2 è noto soprattutto per il mantenimento dei progenitori del nefrone e per la modulazione di reti trascrizionali insieme ad altri regolatori dello sviluppo renale, influenzando i tempi della differenziazione e la strutturazione dei tessuti. Un’espressione deregolata di SIX2 o un’attività alterata di Six2 sono state implicate in anomalie congenite e nella riprogrammazione trascrizionale associata ai tumori, in cui vie di sviluppo vengono cooptate per sostenere una crescita alterata e una maggiore invasività. In quanto proteina nucleare che si lega al DNA, Six2 offre un punto di accesso meccanicistico per studiare i circuiti di regolazione genica, la dinamica degli stati della cromatina e il cross-talk tra vie di segnalazione dello sviluppo.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Six2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene SIX2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del SIX2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto SIX2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Six2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di SIX2 per lo studio della segnalazione di Six2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni SIX2 critici per la funzione di Six2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di SIX2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Six2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Six2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus SIX2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Six2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Six2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia SIX2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio SIX2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.