Six2 CRISPR Activationプラスミド (m): sc-422957-ACT

Six2（sine oculis homeobox homolog 2）は、ホメオボックス型転写因子であり、マウスの器官形成において前駆細胞の維持と系譜（細胞系統）決定を制御する。特に、発生中の腎臓におけるネフロン前駆細胞の自己更新や、分岐形態形成における役割がよく知られている。上皮―間葉シグナル伝達や分化に関連する転写プログラムを制御することで、SIX2は細胞運命の決定、増殖、組織パターニングを司る経路に影響を与える。Six2の発現変化やSIXファミリー転写ネットワークの破綻は、先天性腎奇形や発生異常と関連づけられており、胚組織における遺伝子制御回路の研究標的として有用である。さらにSix2は、幹細胞／前駆細胞生物学および腎発生モデルにおいて、マーカーとして、また機能的な要（ノード）として広く用いられている。

Six2 CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Six2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Six2 CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Six2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSix2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Six2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSix2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSix2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSix2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSix2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。