SIRT3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-425704-ACT

O gene Sirt3 de camundongo codifica a desacetilase mitocondrial dependente de NAD+ SIRT3, um regulador central do metabolismo oxidativo e da homeostase das proteínas mitocondriais. A SIRT3 desacetila enzimas envolvidas no ciclo do TCA, na β-oxidação de ácidos graxos e na cadeia de transporte de elétrons, moldando assim a produção de ATP e o controle de espécies reativas de oxigênio. Por meio da modulação das defesas antioxidantes e das respostas ao estresse mitocondrial, a SIRT3 influencia vias ligadas à adaptação metabólica, à inflamação e à sobrevivência celular. A atividade alterada de SIRT3 tem sido associada, em modelos experimentais, a fenótipos relevantes para disfunção metabólica, neurodegeneração, estresse cardíaco e biologia do câncer.

SIRT3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Sirt3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

SIRT3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Sirt3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Sirt3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de SIRT3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Sirt3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de SIRT3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via SIRT3 em células tumorais com expressão de Sirt3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.