SIMPL Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-425749

Panoramica

Irak1bp1 codifica SIMPL (molecola di segnalazione che interagisce con una chinasi di tipo Pelle), un adattatore citosolico implicato nella segnalazione dei recettori Toll-like e del recettore dell’IL-1 a valle di IRAK1. SIMPL è stato associato alla modulazione di programmi trascrizionali dipendenti da NF-κB che modellano l’attivazione dell’immunità innata, l’espressione di geni infiammatori e le risposte allo stress cellulare. Nei sistemi murini, l’alterazione della segnalazione associata a SIMPL può influenzare vie guidate dalle citochine, rilevanti per l’infiammazione cronica e per fenotipi di disregolazione immunitaria. Queste proprietà rendono Irak1bp1 un bersaglio utile per analizzare le dinamiche della segnalazione di NF-κB dipendente dallo stimolo e il cross-talk con altre vie infiammatorie in modelli cellulari mieloidi e stromali.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO SIMPL (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Irak1bp1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Irak1bp1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Irak1bp1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina SIMPL.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Irak1bp1 per lo studio della segnalazione di SIMPL, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Irak1bp1 critici per la funzione di SIMPL
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Irak1bp1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal SIMPL CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal SIMPL CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Irak1bp1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal SIMPL Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR SIMPL (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Irak1bp1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Irak1bp1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.