Plásmido CRISPR de Activación (m) Sigma Receptor: sc-422068-ACT

Sigmar1 codifica el receptor sigma-1, una chaperona de membrana del retículo endoplásmico (RE) enriquecida en las membranas del RE asociadas a mitocondrias, donde modula el intercambio de Ca2+ entre el RE y la mitocondria, la proteostasis y las respuestas celulares al estrés. El receptor sigma-1 interactúa con canales iónicos y complejos de señalización para influir en la neurotransmisión, la remodelación lipídica y la homeostasis redox, integrando vías vinculadas a la respuesta a proteínas mal plegadas y a la bioenergética mitocondrial. En sistemas murinos, la actividad de Sigmar1 se ha relacionado con el mantenimiento neuronal, la plasticidad sináptica y la regulación de la señalización inflamatoria en contextos gliales y del sistema inmunitario periférico. La desregulación de la homeostasis dependiente del receptor sigma-1 se estudia en modelos de neurodegeneración, dolor neuropático y estrés cardiometabólico, lo que respalda su relevancia para la investigación de vías mecanísticas.

Sigma Receptor El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Sigmar1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Sigma Receptor El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Sigmar1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Sigmar1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Sigma Receptor. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Sigmar1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Sigma Receptor en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Sigma Receptor en células tumorales con expresión de Sigmar1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.