Siglec-9 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406675

Panoramica

SIGLEC9 codifica Siglec-9, una lectina di tipo immunoglobulinico legante l’acido sialico, espressa prevalentemente su neutrofili, monociti e su sottopopolazioni di cellule NK, dove funziona come recettore inibitorio. Attraverso una segnalazione dipendente dai motivi inibitori basati su tirosina dei recettori immunitari (ITIM) e il reclutamento di fosfatasi come SHP-1/2, Siglec-9 attenua i segnali di attivazione a valle delle vie dei recettori di riconoscimento dei pattern e dei recettori Fc, modulando il rilascio di citochine, la degranulazione e il burst ossidativo. Rilevando glicani sialilati su superfici dell’ospite o microbiche, contribuisce all’omeostasi immunitaria e alla modulazione dell’infiammazione a livello delle interfacce mucosali e vascolari. Una segnalazione alterata di SIGLEC9 e cambiamenti nel panorama della sialilazione sono stati studiati in contesti quali malattie infiammatorie croniche, biologia delle infezioni e immunosoppressione associata ai tumori all’interno del compartimento mieloide.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Siglec-9 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene SIGLEC9 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del SIGLEC9 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto SIGLEC9 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Siglec-9.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di SIGLEC9 per lo studio della segnalazione di Siglec-9, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni SIGLEC9 critici per la funzione di Siglec-9
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di SIGLEC9 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Siglec-9 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Siglec-9 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus SIGLEC9. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Siglec-9 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Siglec-9 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia SIGLEC9 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio SIGLEC9 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.