SHOX2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402950-ACT

SHOX2 (short stature homeobox 2) codifica um fator de transcrição homeobox que regula programas gênicos do desenvolvimento, controlando a identidade celular, a diferenciação e o padrão de formação dos tecidos. Em células humanas, o SHOX2 contribui para redes transcricionais que moldam a cardiogênese e a especificação da linhagem de marcapasso, e pode influenciar características epiteliais–mesenquimais por meio da modulação de alvos downstream. Alterações na expressão de SHOX2 e na metilação do seu promotor têm sido associadas à reprogramação transcricional ligada ao câncer e a fenótipos do desenvolvimento envolvendo a condução cardíaca e características relacionadas ao crescimento. Como regulador que se liga ao DNA, o SHOX2 constitui um ponto acessível para investigar circuitos de regulação gênica, efeitos do estado da cromatina e controle transcricional restrito a linhagens.

SHOX2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SHOX2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

SHOX2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SHOX2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SHOX2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de SHOX2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SHOX2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de SHOX2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via SHOX2 em células tumorais com expressão de SHOX2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.