SHIP-2 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-401622-NIC

INPPL1 codifica a SHIP-2, uma fosfatase de inositol 5 contendo domínio de homologia 2 de Src (SH2) que hidrolisa o fosfatidilinositol (3,4,5)-trifosfato em fosfatidilinositol (3,4)-bisfosfato, ajustando a amplitude e a duração da sinalização PI3K–AKT. Por meio da modulação dos reservatórios de fosfoinositídeos, a SHIP-2 influencia a sinalização do receptor de insulina, o tráfego de membranas, a dinâmica do citoesqueleto e a endocitose de receptores, com efeitos a jusante sobre a homeostase da glicose e programas de crescimento celular. Alterações na atividade ou na expressão de SHIP-2 têm sido associadas à resistência à insulina e a características metabólicas, e o controle desregulado da via PI3K também relaciona INPPL1 a estudos de sinalização oncogênica, migração e crosstalk com vias inflamatórias. Essas funções tornam a SHIP-2 um nó útil para dissecar mecanismos de feedback dependentes de fosfatases em redes de sinalização.

SHIP-2 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus INPPL1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de INPPL1. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função INPPL1. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com INPPL1 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.