SH-PTP2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400260-ACT

PTPN11は、細胞質性のタンパク質チロシンホスファターゼであるSH-PTP2（SHP2）をコードしており、SHP2はタンデム型のSH2ドメインを介して、活性化された受容体型チロシンキナーゼやサイトカイン受容体を下流のシグナル伝達へと連結します。SHP2はRAS–MAPK/ERK経路の主要な正の制御因子であり、PI3K–AKT経路の調節にも関与して、細胞増殖・生存・遊走・分化といったプログラムの形成に寄与します。さらに、ドッキングタンパク質やフィードバック制御ノードの脱リン酸化を通じて、増殖因子シグナルおよび免疫シグナルのネットワーク全体にわたり、シグナルの強度と持続時間に影響を与えます。PTPN11の活性や発現の異常は、発達関連症候群や複数のがんの文脈と関連しており、腫瘍性シグナル伝達や薬剤抵抗性回路の機構研究における代表的な標的となっています。

SH-PTP2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性PTPN11の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

SH-PTP2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における PTPN11 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPTPN11転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性SH-PTP2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPTPN11遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSH-PTP2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPTPN11発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSH-PTP2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。