Plásmido CRISPR de Activación (h) SH-PTP2: sc-400260-ACT

PTPN11 codifica SH-PTP2 (SHP2), una fosfatasa tirosina de proteínas citosólica que contiene dominios SH2 en tándem y que acopla receptores tirosina quinasa activados y receptores de citocinas con la señalización aguas abajo. SHP2 es un regulador positivo clave de RAS–MAPK/ERK y contribuye a la modulación de la vía PI3K–AKT, configurando programas de proliferación, supervivencia, migración y diferenciación celular. Mediante la desfosforilación de proteínas adaptadoras y nodos de retroalimentación, SHP2 influye en la amplitud y la duración de la señal a través de redes de señalización de factores de crecimiento e inmunitarias. La actividad y la expresión desreguladas de PTPN11 se asocian con síndromes del desarrollo y con múltiples contextos de cáncer, lo que lo convierte en una diana frecuente para estudios mecanísticos de la señalización oncogénica y de los circuitos de resistencia.

SH-PTP2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de PTPN11 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

SH-PTP2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus PTPN11 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional PTPN11, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de SH-PTP2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo PTPN11 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de SH-PTP2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía SH-PTP2 en células tumorales con expresión de PTPN11 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.