SGTA CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-424626

概要

マウスのSgtaは、小型のグルタミンリッチなテトラトリコペプチドリピート（TPR）含有タンパク質α（SGTA）をコードしています。SGTAは細胞質のコシャペロンで、HSP70/HSP90複合体に結合し、TPRドメインを介して疎水性のクライアントタンパク質を認識します。SGTAは新生タンパク質や誤局在タンパク質の品質管理に関与し、折りたたみ、膜へのターゲティング、プロテアソーム分解経路のいずれへ振り分けるかという選別を調整します。また、BAG6/GETを介したテールアンカー型タンパク質の処理や、ユビキチン依存的なタンパク質回転の制御にも関与し、SGTAをプロテオスタシスおよび細胞ストレス応答と結び付けています。SGTAが関与するタンパク質恒常性経路の破綻は、神経変性の機構研究、がん細胞のストレス適応、膜タンパク質生合成異常に関わる疾患の研究において重要です。

SGTA CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるSgta遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Sgta内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Sgtaのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、SGTAタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、SGTAシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Sgta欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• SGTAの機能に不可欠なSgtaエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Sgtaゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• SGTA CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびSGTA CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Sgta遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  SGTA HDRプラスミド（m）および SGTA HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSgtaホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSgta標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。