SGTA CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404399-ACT

ヒトSGTA（small glutamine-rich tetratricopeptide repeat-containing protein alpha）は、HSP70/HSC70およびHSP90に結合して、タンパク質品質管理とクライアントタンパク質の取り扱いを協調的に制御する共シャペロンです。SGTAは疎水性ポリペプチドやテールアンカー型膜タンパク質のトリアージに関与し、膜挿入経路への送達またはプロテアソーム分解への振り分けに影響を与えるとともに、BAG6/GET標的化軸と機能的に連携します。これらの相互作用を通じて、SGTAはプロテオスタシスの維持を助け、受容体やシグナル伝達タンパク質の成熟を調節し、ER関連分解（ERAD）などの細胞ストレス応答にも影響を及ぼします。SGTAを含むシャペロンネットワークの破綻は、がん生物学や神経変性に関連する状況におけるタンパク質恒常性の変化と関連づけられており、経路解析のための機構的ハブとしての価値を支持しています。

SGTA CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SGTAの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

SGTA CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SGTA 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSGTA転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性SGTAの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSGTA遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSGTA依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSGTA発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSGTA経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。