Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
SGLT-2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-434235
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- SGLT-2 Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico SGLT-2, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: SGLT-2 Antibody (D-6): sc-393350
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
SGLT-2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m) | sc-434235 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
Slc5a2 codifica il cotrasportatore sodio–glucosio SGLT-2, un trasportatore ad alta capacità che sfrutta i gradienti di Na⁺ per riassorbire il glucosio attraverso la membrana apicale delle cellule epiteliali del tubulo prossimale renale. Regolando il flusso transepiteliale di glucosio, SGLT-2 influenza l’equilibrio energetico cellulare e l’omeostasi osmotica e interagisce con processi di trasporto ionico che determinano la gestione tubulare di soluti e acqua. Alterazioni dell’attività di SLC5A2/SGLT-2 sono associate a una glucosuria disregolata e a un’alterata omeostasi glicemica sistemica, rendendolo rilevante per lo studio dei fenotipi metabolici e della fisiologia renale. Nel topo, Slc5a2 rappresenta un modello maneggevole per indagare i meccanismi di trasporto del glucosio e il contributo del rene alle risposte allo stress metabolico.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO SGLT-2 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Slc5a2 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Slc5a2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Slc5a2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina SGLT-2.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Slc5a2 per lo studio della segnalazione di SGLT-2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni Slc5a2 critici per la funzione di SGLT-2
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Slc5a2 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal SGLT-2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal SGLT-2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Slc5a2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal SGLT-2 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR SGLT-2 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Slc5a2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Slc5a2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.