SGLT-2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402074-ACT

SLC5A2は、ナトリウム‐グルコース共輸送体SGLT-2をコードしており、Na⁺勾配を利用して高容量のグルコース再吸収を行う頂端膜（アピカル膜）輸送体である。典型的には腎近位尿細管で機能する。経上皮的なグルコースフラックスを制御することで、SGLT-2はイオン輸送、細胞のエネルギー代謝、浸透圧バランスを結び付けており、その発現は上皮の極性化やソリュートキャリア（SLC）ネットワークと協調して調節される。SLC5A2活性の変化は腎におけるグルコース取り扱いの表現型や全身の糖恒常性に関与するため、代謝制御を研究する上で有用な標的となる。さらにSGLT-2は、輸送体の生合成、トラフィッキング、基質共役型の構造変化ダイナミクスを検討するための扱いやすい膜タンパク質モデルにもなる。

SGLT-2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SLC5A2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

SGLT-2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SLC5A2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSLC5A2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性SGLT-2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSLC5A2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSGLT-2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSLC5A2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSGLT-2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。