Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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SF-1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-402334-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- SF-1 Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- SF-1ダブルニカースプラスミド（h）およびSF-1ダブルニカースプラスミド（h2）は、NR5A1を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: SF-1 抗体 (A-1): sc-393592
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
SF-1 Double Nickaseプラスミド (h) | sc-402334-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
SF-1 Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-402334-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
NR5A1はステロイド産生因子1（SF-1）をコードしており、SF-1は副腎および性腺の発生と、ステロイド産生細胞の分化機能を統括するオーファン核内受容体型の転写因子である。SF-1は、ステロイドホルモン生合成、コレステロール輸送、生殖軸シグナル伝達に関わる遺伝子を制御し、核内受容体ネットワークとcAMP/PKA応答性の転写プログラムを統合する。ヒトではNR5A1活性の変化が、性分化疾患、副腎不全、ステロイド産生の異常と関連しており、内分泌系の系譜決定やホルモン制御下の遺伝子発現を研究するうえで重要な結節点となる。そのためSF-1は、関連する細胞モデルにおいてステロイド産生経路の転写制御や発生運命決定を解析するための分子学的な入口として広く用いられている。
SF-1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における NR5A1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、NR5A1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、NR5A1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、NR5A1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。