SETX Plasmide Double Nickase (h): sc-402354-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- SETX Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il SETX Double Nickase Plasmid (h) e il SETX Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira SETX. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: SETX Antibody (QQ-7): sc-100319
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
SETX Plasmide Double Nickase (h) | sc-402354-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
SETX Plasmide Double Nickase (h2) | sc-402354-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SETX (senataxin) codifica un’elicasi DNA/RNA che risolve gli ibridi RNA:DNA (R-loop) e supporta la terminazione della trascrizione, la risoluzione dei conflitti tra replicazione e trascrizione e la stabilità del genoma. La proteina agisce nei siti di danno al DNA ed è collegata a vie che includono la risposta al danno del DNA, la ricombinazione omologa e il mantenimento dell’integrità dei telomeri e delle forcelle di replicazione. Attraverso queste attività, SETX contribuisce a prevenire l’accumulo di lesioni associate alla trascrizione e di eventi di ricombinazione aberranti. La disregolazione o le mutazioni di SETX sono associate a neurodegenerazione e a fenotipi di instabilità genomica, rendendolo un bersaglio chiave per studi meccanicistici sull’accoppiamento tra processamento dell’RNA e riparazione del DNA.
SETX Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus SETX nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di SETX. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di SETX. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con SETX interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.