Plasmide Double Nickase (m) SESN3: sc-429191-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) SESN3 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide SESN3 Double Nickase (m) et le plasmide SESN3 Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Sesn3. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
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Plasmide Double Nickase (m) SESN3 | sc-429191-NIC | 20 µg | $410.00 |
Sesn3 code la sésitrine 3 (SESN3), une protéine induite par le stress qui contribue à coordonner l’adaptation cellulaire aux contraintes métaboliques et oxydatives. Dans les cellules de souris, SESN3 est associée à des programmes de détection des nutriments et d’homéostasie redox, en interaction avec la signalisation AMPK–mTOR ainsi qu’avec des réseaux plus larges d’autophagie et de réponse antioxydante. Par ces voies, SESN3 peut influencer la fonction mitochondriale, la protéostasie et la signalisation inflammatoire, ce qui la rend pertinente pour l’étude de la dérégulation métabolique et des réponses tissulaires au stress. Des altérations de l’activité de SESN3 ont été étudiées dans le contexte de phénotypes liés à l’obésité, de modifications de la signalisation de l’insuline et d’états inflammatoires, ce qui étaye son utilisation comme nœud d’interrogation mécanistique des voies de signalisation.
SESN3 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Sesn3 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Sesn3. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Sesn3. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Sesn3.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.