Plasmide CRISPR d'Activation (h) SESN2: sc-402442-ACT

Le SESN2 (Sestrine-2) humain est une protéine inductible par le stress qui coordonne l’adaptation cellulaire aux agressions métaboliques, oxydatives et génotoxiques. Il module la signalisation AMPK–mTORC1, soutient l’homéostasie rédox via des réponses antioxydantes et contribue à l’autophagie ainsi qu’aux programmes de détection des nutriments qui façonnent la survie et la croissance cellulaires. SESN2 est fréquemment étudié dans le contexte de l’inflammation et du stress mitochondrial, où il influence l’accumulation de ROS et les réseaux transcriptionnels en aval. Une signalisation SESN2 dérégulée a été associée à des dysfonctionnements cardiométaboliques, à des maladies neurodégénératives et à des phénotypes de stress liés au cancer, ce qui en fait un nœud pertinent pour des études à l’échelle des voies de signalisation.

SESN2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SESN2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

SESN2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SESN2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SESN2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de SESN2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SESN2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de SESN2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie SESN2 dans les cellules tumorales présentant une expression de SESN2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.