Serpinb3a Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-422808-ACT

Serpinb3a de camundongo codifica um inibidor de protease serina (serpina) da clade B, implicado na regulação da atividade de proteases intracelulares, nas respostas ao estresse celular e na homeostase epitelial. Como serpina intracelular, a Serpinb3a pode influenciar processos dependentes de proteases associados à inflamação, ao remodelamento tecidual e à integridade de barreira, interseccionando-se com vias que modulam a apoptose, a adaptação ao estresse oxidativo e a sinalização imune. A expressão alterada de membros da família das serpinas tem sido associada a microambientes inflamatórios desregulados e a fenótipos de lesão epitelial, tornando a Serpinb3a um nó molecular útil para estudar programas de estresse e de proteostase dependentes do contexto. Em modelos murinos, a dinâmica de expressão de Serpinb3a é frequentemente avaliada em estudos de dano tecidual, remodelamento fibrótico e patologia mediada pelo sistema imune, nos quais o equilíbrio protease–antiprotease é um determinante-chave dos desfechos celulares.

Serpinb3a O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Serpinb3a sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Serpinb3a O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Serpinb3a em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Serpinb3a, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Serpinb3a. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Serpinb3a nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Serpinb3a no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Serpinb3a em células tumorais com expressão de Serpinb3a silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.