Serine racemase CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402360-ACT

ヒトSRRは、L-セリンとD-セリンの相互変換を触媒するピリドキサールリン酸（PLP）依存性酵素であるセリンラセマーゼをコードしている。D-セリンはNMDA型グルタミン酸受容体の主要な共作動薬である。セリンラセマーゼはD-セリンの利用可能量を調節することで、神経細胞およびグリア細胞の文脈における興奮性神経伝達、シナプス可塑性、ならびに下流のカルシウム依存性シグナル伝達カスケードに影響を与える。SRR活性は、酸化ストレスや細胞のエネルギーバランスを制御する経路との相互作用を介して、アミノ酸代謝とレドックス生物学を結び付けている。SRR発現やD-セリン恒常性の変化は、神経精神疾患および神経変性疾患の病態機序と関連付けられており、SRRはNMDA受容体関連シグナルと代謝制御を研究するうえで有用な標的となる。

Serine racemase CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SRRの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Serine racemase CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SRR 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSRR転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Serine racemaseの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSRR遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSerine racemase依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSRR発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSerine racemase経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。