SERCA2 Double Nickaseプラスミド (h): sc-400417-NIC

ATP2A2は、ヒトの筋小胞体／小胞体Ca2+ ATPアーゼであるSERCA2をコードする。SERCA2はP型ATPアーゼとして細胞質Ca2+をER腔内へ輸送し、Ca2+貯蔵とシグナル伝達の恒常性を維持する。ER内Ca2+量を規定することで、SERCA2は興奮収縮連関、ストア作動性Ca2+流入（SOCE）の動態、ならびにERストレス応答に関連するタンパク質折りたたみ、分泌、細胞生存経路のCa2+依存的制御を調節する。ATP2A2の機能が乱れると細胞内Ca2+オシレーションが破綻し、カルシニューリン／NFATや小胞体アンフォールドタンパク質応答（UPR）などの下流シグナルネットワークが変化し得る。ATP2A2の変異はダリエ病と関連し、ERのCa2+制御が心臓および上皮の生理に影響する状況でも関与が示唆されており、Ca2+シグナル伝達とプロテオスタシスの機序研究を支持する。

SERCA2 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における ATP2A2 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、ATP2A2内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、ATP2A2の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、ATP2A2が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。