Septin 4 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-422333-ACT

O gene Sept4 de camundongo codifica a septina 4, um arcabouço citoesquelético ligante de GTP que se monta em filamentos hetero-oligoméricos e estruturas em forma de anel no córtex celular. A septina 4 coordena a organização de actina e microtúbulos para regular a citocinese, a polaridade celular, a compartimentalização de membranas e o tráfego de vesículas, com funções adicionais na arquitetura relacionada a cílios em contextos especializados. Ao moldar barreiras de difusão e coordenar eventos contráteis, a septina 4 influencia processos como a morfogênese neuronal e a espermatogênese, e sua desregulação é estudada em relação à neurodegeneração, à remodelação citoesquelética associada a tumores e a fenótipos de fertilidade. Essas funções tornam o Sept4 um nó útil para investigar a sinalização do citoesqueleto, o controle da divisão celular e programas de remodelação responsivos ao estresse em modelos murinos.

Septin 4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Sept4 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Septin 4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Sept4 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Sept4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Septin 4. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Sept4 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Septin 4 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Septin 4 em células tumorais com expressão de Sept4 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.