Septin 11 Double Nickaseプラスミド (h): sc-407969-NIC

SEPT11はセプチン11をコードしており、セプチン11はGTP結合性の細胞骨格タンパク質です。セプチン11は他のセプチンとともにヘテロオリゴマー性のセプチンフィラメントや環状構造を形成し、膜上で拡散バリアおよび足場（スキャフォールド）として機能します。セプチン11は、細胞質分裂、細胞極性、小胞輸送、神経突起形態の過程におけるアクチン—微小管の協調に寄与し、皮質（コルチカル）構造の組織化や細胞分裂の正確性を制御する経路と統合的に関わります。セプチンネットワーク動態の変化やSEPT11の調節異常は、細胞骨格の再編成と膜コンパートメント化が中心となる、異常増殖・遊走・神経生物学的文脈で研究されています。これらの特性により、SEPT11はヒト細胞モデルにおいて、細胞骨格経路間のクロストーク、膜関連シグナル伝達、ならびに細胞周期に連動した構造的チェックポイントを検証するための有用な標的となります。

Septin 11 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における SEPT11 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、SEPT11内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、SEPT11の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、SEPT11が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。