SENP5 Double Nickaseプラスミド (h): sc-404428-NIC

ヒトSENP5は、タンパク質基質からSUMO修飾を除去するSUMO特異的プロテアーゼをコードしており、これによりSUMO依存的なタンパク質の安定性、局在、ならびに巨大分子複合体の組み立ての制御を調整します。SENP5の活性は細胞周期進行と有糸分裂イベントの協調に寄与し、中心体や核小体関連プロセス、さらには細胞ストレス時のプロテオスタシス維持における役割が報告されています。SUMO化と脱SUMO化のバランスを制御することで、SENP5は細胞の適応度とゲノムの完全性を規定する転写プログラムやDNA損傷応答シグナル伝達に影響を及ぼします。SENPファミリーの機能変化を含むSUMO経路活性の破綻は、複数の疾患コンテキストで観察される増殖性の表現型や分子学的特徴と関連づけられており、SENP5は機構解明研究における有用な結節点となります。

SENP5 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における SENP5 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、SENP5内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、SENP5の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、SENP5が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。