SEMA7A Double Nickaseプラスミド (h): sc-403873-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- SEMA7A Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- SEMA7Aダブルニカースプラスミド（h）およびSEMA7Aダブルニカースプラスミド（h2）は、SEMA7Aを標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: SEMA7A 抗体 (C-6): sc-374432
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
SEMA7A Double Nickaseプラスミド (h) | sc-403873-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
SEMA7A Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-403873-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SEMA7A（セマフォリン7A/CD108）は、グリコシルホスファチジルイノシトール（GPI）アンカー型のガイダンス／免疫調節タンパク質であり、細胞—細胞および細胞—細胞外基質（マトリックス）相互作用を媒介します。インテグリンやプレキシン経路などの受容体を介してシグナルを伝達し、細胞骨格の再構築、接着、遊走、軸索伸長を調節するほか、炎症性活性化や組織リモデリングのプログラムにも影響を与え得ます。ヒト細胞では、SEMA7Aは免疫細胞のトラフィッキングや線維化応答の制御に関与するとされ、慢性炎症、神経生物学、ならびに微小環境のリモデリングに関連する機序との結び付きが示唆されています。SEMA7Aの発現やシグナル伝達の破綻は、線維化や腫瘍関連の免疫・間質ダイナミクスにおける病的変化と関連付けられており、機序解明研究の標的としての有用性を支持します。
SEMA7A ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における SEMA7A 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、SEMA7A内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、SEMA7Aの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、SEMA7Aが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。