SEMA5A Double Nickaseプラスミド (m): sc-422885-NIC
- 対象生物種: mouse
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- SEMA5A Double Nickaseプラスミド (m)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- SEMA5Aダブルニカースプラスミド（m）およびSEMA5Aダブルニカースプラスミド（m2）は、Sema5aを標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
SEMA5A Double Nickaseプラスミド (m) | sc-422885-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
SEMA5A Double Nickaseプラスミド (m2) | sc-422885-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
マウスの Sema5a は、膜貫通型のガイダンス因子である SEMA5A をコードしており、SEMA5A はセマフォリンファミリーに属します。SEMA5A は受容体との相互作用を介して、細胞骨格の再編成や接着ダイナミクスに影響を与えることで、軸索のナビゲーション、樹状突起のパターニング、ならびに細胞運動性を調節します。SEMA5A シグナルは、成長円錐の誘導や細胞—細胞／細胞外マトリックス（ECM）相互作用を制御する経路と連関し、神経回路形成や組織の秩序化に寄与します。Sema5a の発現や機能の変化は、神経発達および神経行動に関わる表現型と関連づけられており、セマフォリンシグナルの破綻は、異常な遊走・浸潤プログラムの文脈でも研究されています。これらの特徴により、Sema5a は発生期の配線機構、シナプス結合性、ならびにセマフォリンを介した細胞運動制御の仕組みを解明するための有用な標的となります。
SEMA5A ダブルニカースプラスミド（m）は、mouse 細胞株における Sema5a 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、Sema5a内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、Sema5aの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、Sema5aが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。