secretin receptor CRISPR Activationプラスミド (m): sc-435601-ACT
- 対象生物種: mouse
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- secretin receptor CRISPR Activationプラスミド (m)は、特異的に遺伝子の発現量を増加させるため、相乗的活性化メディエーター(SAM)転写活性化システムです。
- secretin receptor CRISPR Activationプラスミド (m)は、1:1:1の質量比で以下の3つのプラスミドがら成る：トランス活性化ドメインVP64に溶解する非活性化されたCas9 (dCas9)ヌクレアーゼ(D10A と H840A)をコード化したのプラスミド（ブラストサイジン耐性遺伝子を含めて）、MS2-p65-HSF1融合蛋白質をコード化したのプラスミド（ハイグロマイシン耐性遺伝子を含めて）、2つのMS2 RNAアプタマーに溶解する目標特異的な20ntガイドRNAをコード化したのプラスミド（ピューロマイシン耐性遺伝子を含めて）。
- 得られたSAM複合体は、部位特異的な約200-250nt転写開始点の上流の領域に結合し、転写因子の強いリクルートメントを提供し、遺伝子の高い活性化効果が得られます。
- secretin receptor CRISPR活性化プラスミド（m）およびsecretin receptor CRISPR活性化プラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Sctr転写開始点の上流にある異なる調節領域を標的としています。いずれか一方、または両方のデザインが利用可能である可能性があります
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
secretin receptor CRISPR Activationプラスミド (m) | sc-435601-ACT | 20 µg | $397.00 |
マウスのSctrはセクレチン受容体をコードしており、これはセクレチンに結合するクラスBのGPCRです。消化管および膵臓において、重炭酸に富む液体の分泌や上皮輸送を調節します。受容体の活性化は主にGs–アデニル酸シクラーゼ経路を介してcAMPを増加させ、PKA依存的な転写・代謝プログラムを活性化します。さらに、細胞種によってはカルシウムシグナルに影響する追加のカップリングも起こりえます。Sctrの活性は神経内分泌系および腸–脳間コミュニケーションにも寄与し、消化生理やエネルギー恒常性の形成に関わります。セクレチン受容体シグナルの異常は、膵外分泌機能障害、胆汁うっ滞性および消化管疾患、ならびに神経行動学的表現型のモデルで検討されており、Sctrはin vivoおよび培養細胞における経路解析に有用なノードとなっています。
secretin receptor CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Sctrの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。
secretin receptor CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Sctr 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。
標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSctr転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性secretin receptorの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSctr遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるsecretin receptor依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSctr発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるsecretin receptor経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。