Plásmido CRISPR de Activación (h) secretin receptor: sc-403329-ACT

SCTR codifica el receptor humano de secretina, un receptor acoplado a proteína G de clase B que se une a la hormona peptídica gastrointestinal secretina para regular la secreción epitelial de líquidos y bicarbonato, la función del conducto pancreático y la fisiología biliar. Tras la unión del ligando, SCTR se acopla principalmente a Gs para estimular la adenilato ciclasa, aumentar el AMPc y activar programas transcripcionales y de transporte iónico dependientes de PKA, con señalización adicional dependiente del contexto a través de vías de calcio y MAPK. La actividad del receptor contribuye a una homeostasis digestiva y metabólica coordinada y se estudia con frecuencia en epitelios secretorios y en contextos neuroendocrinos. La señalización alterada de GPCR/AMPc en la que participa SCTR se ha investigado en modelos de disfunción pancreática y biliar, trastornos gastrointestinales y biología tumoral sensible a hormonas, como un mecanismo que moldea la secreción, la proliferación y la diferenciación celulares.

secretin receptor El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SCTR sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

secretin receptor El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SCTR en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SCTR, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de secretin receptor. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SCTR y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de secretin receptor en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía secretin receptor en células tumorales con expresión de SCTR silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.