SCUBE2 CRISPR Activationプラスミド (m): sc-425305-ACT

Scube2はSCUBE2をコードしており、SCUBE2はEGF様リピートとCUBドメインを含む分泌性の細胞表面糖タンパク質で、細胞外の足場（スキャフォールド）およびシグナル伝達の調節因子として機能します。マウス組織では、SCUBE2は成長因子の利用可能性や受容体シグナル伝達の動態に影響を与えることで、発生パターニングや細胞間コミュニケーションに寄与し、Hedgehogシグナル伝達などの経路との関連も報告されています。リガンド—受容体相互作用や細胞外マトリックス関連プロセスを形成することにより、SCUBE2は細胞運命決定、遊走、上皮の組織化に影響し得ます。SCUBE2の発現変化は、がん生物学や発生異常に関わるシグナル伝達プログラムの破綻と関連づけられており、経路中心の研究における機構的ノードとしての利用を支持します。

SCUBE2 CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Scube2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

SCUBE2 CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Scube2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はScube2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性SCUBE2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のScube2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSCUBE2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびScube2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSCUBE2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。