SCP2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-422828

Panoramica

Il gene murino Scp2 codifica la sterol carrier protein 2 (SCP2), una piccola proteina di trasferimento lipidico che lega e trasporta all’interno delle cellule colesterolo, intermedi degli acidi biliari e acil-CoA di acidi grassi a lunga catena, con ruoli di rilievo nella gestione dei lipidi a livello perossisomiale e citosolico. SCP2 sostiene il traffico lipidico intracellulare e contribuisce alla β-ossidazione perossisomiale, al metabolismo dei lipidi etere e all’omeostasi degli steroli, intersecandosi con reti più ampie del metabolismo lipidico che influenzano la composizione delle membrane e le risposte allo stress ossidativo. Alterazioni della funzione di SCP2 sono state associate a un utilizzo compromesso di colesterolo e acidi grassi e vengono frequentemente studiate nel contesto di disregolazione metabolica e fenotipi di stress cellulare guidati dai lipidi. Scp2 è quindi rilevante per ricerche meccanicistiche sulla biologia dei perossisomi, sul trasporto lipidico e sul rimodellamento delle vie metaboliche in tipi cellulari rilevanti per la malattia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO SCP2 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Scp2 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Scp2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Scp2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina SCP2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Scp2 per lo studio della segnalazione di SCP2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Scp2 critici per la funzione di SCP2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Scp2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal SCP2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal SCP2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Scp2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal SCP2 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR SCP2 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Scp2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Scp2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.