SCOT CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404705-ACT

ヒトOXCT1は、ミトコンドリア酵素であるスクシニルCoA：3-オキソ酸CoA転移酵素（SCOT）をコードしている。SCOTは、アセト酢酸をアセトアセチルCoAへ変換してアセチルCoA産生およびTCA回路代謝へ導くことで、ケトン体利用における律速段階を触媒する。SCOT活性はケトン体分解（ケトリシス）を細胞のバイオエネルギー、レドックスバランス、ならびに断食時や高いエネルギー需要下でケトン体を酸化する組織における代謝柔軟性と結び付ける。OXCT1の機能は脂肪酸酸化およびミトコンドリアのアセチルCoAフラックスと統合されており、酸化的リン酸化やアナプレロシス（補充反応）などの下流経路に影響を与える。OXCT1が関与するケトン体代謝の遺伝学的攪乱や調節異常は代謝機能障害の表現型と関連づけられており、ミトコンドリア代謝や栄養感知に関する研究における標的としての有用性を支持している。

SCOT CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性OXCT1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

SCOT CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における OXCT1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はOXCT1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性SCOTの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のOXCT1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSCOT依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびOXCT1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSCOT経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。