SCAMP1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403757-ACT

SCAMP1（分泌キャリア膜タンパク質1）は、リサイクリングエンドソームや輸送小胞に豊富に存在する4回膜貫通型タンパク質で、制御された膜輸送、（小胞の）出芽、ならびに細胞膜へのカーゴのリサイクリングを支えます。受容体のターンオーバー、シナプス小胞の動態、分泌顆粒の放出を協調させるエンドサイトーシス／エキソサイトーシス経路の中で機能しており、その活性は細胞恒常性やシグナル応答性と結び付いています。小胞輸送や膜リモデリングに影響を与えることで、SCAMP1はシグナル受容体やトランスポーターの細胞表面での利用可能量を調節し得ます。これらの過程は増殖性疾患や神経生物学的疾患でしばしば破綻します。SCAMPファミリータンパク質が関与する輸送ネットワークの異常は、分泌の変化、受容体リサイクリングの異常、細胞の遊走・浸潤関連表現型の変化などの文脈で研究されています。

SCAMP1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SCAMP1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

SCAMP1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SCAMP1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSCAMP1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性SCAMP1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSCAMP1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSCAMP1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSCAMP1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSCAMP1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。