SAV1 CRISPR Activationプラスミド (m): sc-425662-ACT

Sav1 は、Salvador ファミリー WW ドメイン含有タンパク質 1（SAV1）をコードしており、Hippo シグナル伝達経路の足場（スキャフォールド）成分として、MST1/2 および LATS キナーゼと協調して YAP/TAZ の活性と、増殖・アポトーシス・組織成長を制御する転写出力を調節します。マウス細胞では、SAV1 はキナーゼ複合体の組み立てとリン酸化カスケードを統括し、増殖促進性遺伝子発現プログラムを抑制することで、コンタクトインヒビションと上皮恒常性を支えます。SAV1 に関連する Hippo シグナルの破綻は、実験モデルにおいて臓器サイズ制御の異常、逸脱した再生応答、腫瘍関連表現型と結び付いており、Sav1 は成長制御やメカノトランスダクションを研究するうえで有用なノードとなります。SAV1 は細胞骨格ダイナミクスや接着部位（ジャンクション）シグナルとも連関しており、細胞極性や機械的キューが転写状態にどのように影響するかを検討するための手掛かりも提供します。

SAV1 CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Sav1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

SAV1 CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Sav1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSav1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性SAV1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSav1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSAV1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSav1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSAV1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。