Sar1B CRISPR Activationプラスミド (h): sc-412122-ACT

ヒトSAR1Bは、Sar1Bという小型のCOPII GTPアーゼをコードしており、Sec23/24をリクルートして小胞体（ER）出口部位からの小胞出芽を促進することで、ERからゴルジ体への輸送を開始します。Sar1BはGTPの結合と加水分解を制御された形で行うことで、カーゴ選択と膜曲率の形成を協調的に制御し、分泌、リポタンパク質輸送、ならびにERストレス応答に関連するより広範なプロテオスタシスネットワークを支えています。SAR1B依存的なCOPIIダイナミクスの破綻は、脂質吸収やカイロミクロン分泌の先天性疾患と関連づけられており、腸管における脂質取り扱いおよび全身の脂質恒常性を研究するうえで重要です。Sar1Bはまた、ヒト細胞における分泌経路の制御、膜輸送のチェックポイント、オルガネラ間コミュニケーションを解析するためのモデルノードとしても用いられています。

Sar1B CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SAR1Bの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Sar1B CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SAR1B 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSAR1B転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Sar1Bの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSAR1B遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSar1B依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSAR1B発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSar1B経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。