Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
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Sar1a Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-422799
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Sar1a Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico Sar1a, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Sar1a Antibody (K-44): sc-130463
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Sar1a Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m) | sc-422799 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
Sar1a codifica la piccola GTPasi SAR1A, un iniziatore essenziale della formazione di vescicole rivestite da COPII nei siti di uscita dal reticolo endoplasmatico, che guida il traffico dal RE all’apparato di Golgi. Alternando gli stati legati a GDP e a GTP, SAR1A promuove la curvatura di membrana e recluta i complessi SEC23/SEC24 e SEC13/SEC31, sostenendo il flusso della via secretoria e la proteostasi. Il traffico dipendente da Sar1a influisce sulla gestione di lipidi e lipoproteine, sulla secrezione della matrice extracellulare e sulla consegna di recettori alla superficie cellulare, collegandolo a un’ampia regolazione dei programmi di segnalazione e differenziamento. L’alterazione del trasporto mediato da COPII e dell’omeostasi del RE è implicata nelle risposte allo stress e in patologie rilevanti per fenotipi dello sviluppo e metabolici, rendendo Sar1a un nodo utile per studi meccanicistici della biologia dipendente dalla secrezione.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Sar1a (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Sar1a in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Sar1a insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Sar1a a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Sar1a.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Sar1a per lo studio della segnalazione di Sar1a, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni Sar1a critici per la funzione di Sar1a
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Sar1a per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal Sar1a CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Sar1a CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Sar1a. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal Sar1a Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Sar1a (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Sar1a per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Sar1a definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.