SAPK4 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400423-ACT

MAPK13は、ストレス応答性タンパク質キナーゼ4（SAPK4／p38δ）をコードしており、炎症性サイトカイン、酸化ストレス、環境由来の刺激を統合して、状況依存的な転写応答および翻訳後応答へとつなげるp38 MAPKファミリーの一員です。SAPK4は、下流基質のリン酸化や転写因子活性の調節を介して、細胞分化、アポトーシス、細胞骨格ダイナミクス、自然免疫のエフェクタープログラムを制御するMAPKシグナル伝達ネットワークに関与します。MAPK13シグナルの制御異常は、炎症性疾患やがん化表現型など、複数の疾患関連コンテキストで報告されており、p38δ活性は上皮の生物学的特性や免疫—間質相互作用に影響し得ます。ストレス応答経路における一つの結節点として、SAPK4は刺激特異的なシグナルのクロストークや下流の遺伝子発現プログラムを解明する目的で、しばしば研究対象となっています。

SAPK4 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性MAPK13の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

SAPK4 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における MAPK13 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はMAPK13転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性SAPK4の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のMAPK13遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSAPK4依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびMAPK13発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSAPK4経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。