Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
SAP 97 Double Nickaseプラスミド (h): sc-400865-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- SAP 97 Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- SAP 97ダブルニカースプラスミド（h）およびSAP 97ダブルニカースプラスミド（h2）は、DLG1を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: SAP 97 抗体 (2D11): sc-9961
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
SAP 97 Double Nickaseプラスミド (h) | sc-400865-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
SAP 97 Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-400865-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
DLG1は、シナプス関連タンパク質97（SAP97）をコードしている。SAP97は膜関連グアニル酸キナーゼ（MAGUK）ファミリーに属する足場（スキャフォールド）タンパク質で、細胞間接着部位や神経シナプスにおいて多タンパク質複合体の形成・配置を組織化する。SAP97は、イオンチャネル型グルタミン酸受容体をはじめとする受容体／チャネルの輸送（トラフィッキング）と安定化を調節し、これらを細胞骨格やシグナル伝達因子と結び付けることで、シナプス強度や極性の形成に寄与する。PDZ、SH3、GK各ドメインを介した相互作用により、SAP97は接着、興奮性、接着部位のリモデリングに関わるシグナルモジュールを統合する。DLG1/SAP97の発現量や局在の変化は、神経発達・神経精神疾患様の表現型に加え、上皮極性の破綻や、腫瘍に伴う細胞接着経路の変化といった文脈でも研究されている。
SAP 97 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における DLG1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、DLG1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、DLG1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、DLG1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。